DIAGNÓSTICOS DE LABORATORIO DE LA ANEMIA. TÉCNICAS ESPECÍFICAS.

 è Anemia ferropénica. Se define como un cuadro anémico cuyo origen es un déficit de hierro en el organismo, cuyo valor normal en el organismo se encuentra entre 45-55 mg/kg de peso. El hierro del organismo proviene de dos vías principales: la destrucción de los eritrocitos viejos y por la ingesta en la dieta. Su absorción se realiza en su totalidad en el duodeno.

El hierro en el plasma, se encuentra unido a la proteína transferrina. Esta permite que el hierro alcance la medula ósea. Para alcanzar a los eritrocitos el hierro precisa de un receptor específico, denominado receptor de la transferrina.

Determinaciones necesarias para el estudio de la anemia ferropénica:

-          Hierro plasmático o sideremia.

-          Capacidad de saturación de la transferrina: se determina añadiendo una cantidad extra de hierro al suero para saturar totalmente la transferrina.

-          Concentración sérica de la ferritina: cuantifica la reserva sérica del organismo. Los valores normales se encuentran entre 7-340 mcg/l en mujeres y 11-400 mcg/ en hombres, excluyendo episodios inflamatorios en los que estas cifras aumentan.

-           Reactor soluble de la transferrina : la concentración de este depende directamente de la del receptor de transferrina. Además permite determinar la masa eritricitoria y la respuesta al tratamiento con EPO. Los valores normales oscilan sobre 5 mg/l.

-          Tinción de Perls: se emplea para detectar la presencia de hemosiderina celular.

-          Detección de pérdida de hierro.

 è Anemia Megaloblástica. Se define como un déficit de vitamina B12 (cobalimina) o de folato. Se identifica por la presencia de abundantes macrocitos a nivel de la sangre periférica. Su origen suele estar relacionado con malnutrición, mala absorción, gastrectomía total, hiperconsumo y trastorno de a utilización. Los valores normales en sangre de cobalamina se encuentran entre 200-1000 pmol/ml y los de folatos 2-17 mcg/l.

Se determinan de tres formas:

-          Métodos microbiológicos: se realiza observando el crecimiento de un microorganismo en función del factor que queremos medir, a través de la opacificación del medio o mediante la disminución del pH, ocasionado por la producción de ácido láctico.

-          Métodos Isotópicos: para este método se emplea el principio de unión competitiva por los lugares de fijación de una sustancia.

-          Métodos automatizados: se basan fundamentalmente en los isotópicos.

 è Anemia por trastorno en la hemoglobina. Estos trastornos vienen derivados de las alteraciones de la fracción globina de la molécula de hemoglobina. Estas alteraciones dan lugar a modificaciones estructurales o disminución de la síntesis de una cadena determinada de globina.

    El diagnóstico de estas alteraciones depende de las siguientes pruebas:

-          Electroforesis de hemoglobina: tiene como objetivo identificar los diferentes tipos de hemoglobina, diferenciándose ésta según la carga eléctrica que posean. El método más empleado es la electroforesis en medio alcalino.

-          Electrofocalización de hemoglobina: al igual que el anterior consiste en la diferenciación de la hemoglobina, pero en función de su punto isoeléctrico.

-          Cuantificación de hemoglobina A2.

-          Cuantificación de la hemoglobina fetal (F)

-          HPLC en el diagnóstico de la talasemia: método que permite diferenciar tres fracciones de hemoglobina (A, A2 Y F).

-          Otras pruebas: prueba de la reducción, prueba de biología molecular y prueba por fraccionamiento electroforético.

 è Alteraciones en la membrana.

    -          Tipos de anomalías en la membrana eritrocitaria. La mayoría de estas anomalías tienen causas congénitas y en pocos casos son alteraciones adquiridas. Existen cinco grupos:

•   Esferocitosis hereditaria: se identifica por la presencia de hematíes con forma esférica y una mayor fragilidad osmótica. El signo más habitual es la ictericia.
• Eliptocitisis congénita: está caracterizada morfológicamente por la existencia de eritrocitos ovalados o eliptocitos.
• Ovalocitosis del sudeste asiático: en ella los eritrocitos tienen una membrana más rígida.
• Estomatocitosis congénita: agrupa a un conjunto de alteraciones de la membrana.
• Alteraciones adquiridas: son alteraciones estructurales de la membrana originadas por diferentes enfermedades. La presencia de esferocitos en la anemia hemolítica autoinmune, los codocitos en las talasemias y anemias ferropenicas y los equinicitos en los trastornos congénitos del metabolismo eritrocitario son algunas de las alteraciones adquiradas.

 -          Diagnóstico de laboratorio. Para ver la sensibilidad a la hemólisis de los hematíes, se realizan métodos indirectos en las membranopatías. Para esto se realizan diversas pruebas:

•   Fragilidad Osmótica Eritrocitaria: es la prueba más empleada. Consiste en colocar diferentes muestras de eritrocitos a concentraciones decrecientes de NaCl, y a continuación se tiene que comprobar el grado de hemólisis de cada muestra.  La resistencia osmótica de los hematíes depende de la relación entre el volumen y la superficie de estos. Esta resistencia se modifica, aumentando o disminuyendo, si existe una anomalía en la membrana.
• Prueba de la lisis en glicerol acidificado: esta prueba no se utiliza frecuentemente. Consiste en medir la fragilidad eritrocitaria, observando el tiempo que tarda en empezar la hemólisis cuando se incuban en una solución acidificada de glicerol.
• Prueba de la auto hemólisis: esta prueba no es muy eficaz, porque puede dar positivo para cualquier anemia hemolítica. Se realiza poniendo una muestra de eritrocitos, 24 horas en incubación in Vitro a 37 ºC, para observar la capacidad de estos de mantener su integridad, ya sea en presencia o no de glucosa.
• Prueba de la Hemólisis en medio ácido o test de Ham: esta prueba se realiza a las personas que se sospecha que tienen hemoglobinuria paroxística nocturna, que se identifica con episodios de anemia aguda y hemoglobinuria provocada por una intensa hemólisis intravascular.
• Test de sucrosa o sacarosa: se realiza cuando la prueba anterior ha dado negativo y se sigue sospechando de hemoglobinuria paroxística nocturna, porque esta prueba es más sensible que el test de Ham.
• Citometría de flujo: en esta prueba se utilizan anticuerpos monoclonales, ya que la hemoglobinuria paroxística nocturna está causada por una alteración en un gen que interviene en la unión de proteínas.

è Las alteraciones eritroenzimáticas se clasifican en:

• Enzimopatías de la glucólisis anaerobia: los hematíes reciben el ATP de la glucólisis anaerobia, ya que estos no tienen mitocondrias.
• Enzimopatías de la vía de las pentosas y metabolismo del glutatión: el déficit de glucosa 6 fosfato deshidrogenasa es la causa más frecuente del descenso del poder reductor eritrocitaria, esto es lo que se pretende conseguir con este mecanismo.
• Enzimopatías del metabolismo nucleotídico.
• Enzimopatías del sistema reductor de la hemoglobina: el hierro hemínicontiene que estar reducido para que se pueda fijar reversiblemente al oxígeno.